填料：硅膠表面共價(jià)鍵合 α1-酸性糖蛋白

粒徑：5μm

接口：Waters type

出廠保存溶劑：水/異丙醇 (85/15 v/v)

操作條件：

說明：HPLC 規(guī)格的壓力內(nèi)操作，色譜柱填料穩(wěn)定。

          給定柱溫下，柱后壓與流速是線性關(guān)系。

          對(duì)于一些難分離的對(duì)映體，推薦使用更長(zhǎng)的色譜柱。

       *1 使用該類規(guī)格的色譜柱時(shí)，應(yīng)盡量?jī)?yōu)化 HPLC 色譜儀（降低柱外體積），減小死體積。

       *2 使用比推薦溫度更高的柱溫，會(huì)影響色譜柱使用壽命。

操作過程：

• 流動(dòng)相起始條件

• 緩沖溶液配制 – 舉例

• 10mM 乙酸銨緩沖液配制 (1L)：

  1. 稱取 770.8 mg 乙酸銨 (CH3COONH4，純度 > 99%) 至燒杯中。

  2. 加入 800mL 色譜級(jí)水來溶解該鹽，室溫下(20-25℃)放置一段時(shí)間。

  3. 使用經(jīng)稀釋的乙酸或氨水來調(diào)節(jié) pH 值至目標(biāo)值。

  4. 將溶液用 0.22µm 濾膜過濾到有刻度的容量瓶中。

  5. 加水至容量瓶滿刻度線，蓋好瓶塞搖動(dòng)，使溶液混合均勻。

  如果緩沖溶液需要與有機(jī)相混合，通常按體積比混合的，zui 好選擇有刻度的容量瓶或移液管來量取。

  混合后，將流動(dòng)相放置在超聲儀中超聲脫氣。

  注：如果要在流動(dòng)相中加添加劑，添加劑需在調(diào)節(jié) pH 值前加入。

• 流動(dòng)相

微生物在不含或含低比例有機(jī)相的流動(dòng)相中較易滋生。這樣的流動(dòng)相需現(xiàn)配現(xiàn)用。

• 緩沖溶液

通常地，乙酸銨緩沖液的濃度是10-20mM，zui 高是100mM。也可以使用其他緩沖溶液，比如磷酸鈉或磷酸鉀溶液，乙酸鈉溶液，甲酸鹽或檸檬酸鹽溶液。注意，用LC-MS檢測(cè)時(shí)，要選擇適合的緩沖溶液。

• 有機(jī)相

異丙醇是zui 常用的，除此之外，還有甲醇、乙醇和乙腈。這些有機(jī)溶劑的洗脫強(qiáng)度順序是：異丙醇＞乙醇≥乙腈＞甲醇。

• 添加劑

陽(yáng)離子和陰離子添加劑，如 N,N-二甲基正辛胺（DMOA）、三*乙酸（TFA）、辛酸（OA）、七氟丁酸（HFBA）、可少量（≤10mM）添加在流動(dòng)相中以改善保留和立體選擇性。但是，有些添加劑會(huì)強(qiáng)吸附在填料上，難以wan 全洗脫下來，色譜柱的分離能力會(huì)因此受到影響。

注意: 辛酸（OA）和二甲基正辛胺（DMOA）在水中的溶解度很低，室溫下只能溶解到 2mM 辛酸（OA）或 5mM 二甲基正辛胺（DMOA）的濃度。高于該濃度就會(huì)引起溶液分層。

流動(dòng)相中一旦使用了添加劑，該色譜柱就 必 須 專 柱 專 用。

• 樣品

樣品進(jìn)樣量應(yīng)盡量小。建議濃度在0.2mg/mL以下，進(jìn)樣體積 5-10 μL。

盡量用流動(dòng)相來溶解樣品。如果不能溶解，可適當(dāng)增加有機(jī)相的比例。樣品溶液需經(jīng)近似0.5µm濾膜過濾以確保使用前無(wú)沉淀。

注意: 樣品用100. %或高比例的有機(jī)相溶解可能會(huì)導(dǎo)致在線析出。 

        化合物沒有wan 全溶解不能進(jìn)樣。 

色譜柱保養(yǎng)/維護(hù)：

• 為延長(zhǎng)柱子使用壽命，強(qiáng)烈建議使用保護(hù)柱。

• 如果色譜柱被一些疏水性的雜質(zhì)污染，可將色譜柱反接（不連接檢測(cè)器），用水/異丙醇 75/25（v/v）低流速?zèng)_洗過夜（例如，4mm 內(nèi)徑的色譜柱推薦 0.3mL/min）。

• 色譜柱從液相儀器上取下前，需用不含任何鹽或緩沖溶液的流動(dòng)相（例如水/異丙醇 90:10 (v/v)）沖洗。

• 色譜柱保存溶液，推薦使用水/異丙醇 85/15(v/v)。

  短時(shí)間保存，可置于室溫 (<30°C)下。

  長(zhǎng)時(shí)間保存，需放置在冰箱內(nèi)冷藏。

注意事項(xiàng)：

建議使用 CHIRALPAK® AGP 專 用 保護(hù)柱，可減輕分析柱被一些對(duì)固定相有強(qiáng)保留的顆?；螂s質(zhì)的污染。保護(hù)柱需定期更換，尤其是做生物樣品分析。

換算表：

色譜柱內(nèi)徑/流速

壓力

※1 一包保護(hù)柱柱芯中含有2個(gè)柱芯。保護(hù)柱柱芯必 須 配合大賽璐保護(hù)柱柱套（貨號(hào)00081）一起使用。